實(shí)驗(yàn)背景

      醋酸甲地孕酮與醋酸甲羥孕酮均為人工合成的孕激素,在畜牧業(yè)中, 曾被用作動(dòng)物生長促進(jìn)劑。但這類藥物成分會(huì)殘留在動(dòng)物組織中，長期或大量食用含有醋酸甲羥孕酮和醋酸甲地孕酮的食品, 會(huì)使人出現(xiàn)內(nèi)分泌紊亂等一系列癥狀。

      安譜實(shí)驗(yàn)根據(jù)2019年新國標(biāo)GB31660.4-2019 《動(dòng)物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羥孕酮?dú)埩袅康臏y(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，在牛奶基質(zhì)中使用CNW Poly-Sery MCX小柱進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)此方法操作簡(jiǎn)單，回收率高于85%，重現(xiàn)性好。

接下來，小編帶大家走進(jìn)安譜實(shí)驗(yàn)室

一起來學(xué)習(xí)具體檢測(cè)方案吧~

一、樣品前處理

牛奶基質(zhì)：酶解

      取試樣2g，于50 mL離心管中，加內(nèi)標(biāo)外標(biāo)工作液（樣品基質(zhì)空白加40ul 100ppb內(nèi)標(biāo)，樣品基質(zhì)加標(biāo)加入40ul 100ppb內(nèi)標(biāo)+40ul 100ppb混合外標(biāo)，使終檢測(cè)濃度為20ppb）加0.2mol/L乙酸銨緩沖液4 mL，渦旋混勻后加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶（貨號(hào)CFEQ-4-150001-0002）40μL，于37℃下避光水浴低速振蕩，酶解16h。

樣品提取

      試樣經(jīng)酶解后，加乙酸乙酯10 mL，于旋渦振蕩器上劇烈振蕩10 min， 4000 r/min離心5 min，取上清液至梨形瓶中。殘?jiān)右宜嵋阴?0 mL重復(fù)提取1次，合并上清液，50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。加乙腈10 mL、正己烷5ml使溶解，轉(zhuǎn)至50ml離心管中，低速渦旋10s，3000 r/min離心2 min，棄正己烷層，下層液于50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加30%甲醇水溶液3 mL，溶解，備用待上樣。

二、小柱操作

      SBEQ-CA3279  CNW Poly-Sery MCX 混合型強(qiáng)陽離子交換 SPE 小柱 60mg， 3mL/50pcs活化：3mL甲醇平衡：3mL水上樣：待測(cè)液淋洗：3mL水，3mL50%甲醇水，淋洗后抽干洗脫：5mL甲醇濃縮：氮吹吹干，用0.2 mL乙腈（80%）-0.1%甲酸溶液溶解殘余物，渦旋混勻，過0.22 μm濾膜，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

                                                              三、LCMS/MS測(cè)定條件

液相條件色譜柱：Athena C18（2.1*50mm，1.8um）柱溫：30℃進(jìn)樣量：10ul流動(dòng)相：

質(zhì)譜參數(shù)離子源： ESI掃描方式：正離子模式檢測(cè)方式：MRM電離電壓：4000V離子源溫度：100℃霧化溫度：330℃

      定性定量離子醋酸甲地孕酮：385/267（定性定量）385/325（定性）甲羥孕酮乙酸酯（醋酸甲羥孕酮）：387/285（定性）387/327（定性定量）甲地孕酮乙酸酯-D3：388/270（定性定量）

四、實(shí)驗(yàn)譜圖

1. 標(biāo)品譜圖（20ppb）

2. 牛奶基質(zhì)空白譜圖

3. 牛奶基質(zhì)加標(biāo)20ppb

五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

注：本次實(shí)驗(yàn)牛奶基質(zhì)空白中未檢測(cè)到醋酸甲地孕酮，醋酸甲羥孕酮的含量為0.095ug/kg 。

六、實(shí)驗(yàn)耗材 

本次實(shí)驗(yàn)所用耗材如下，供大家參考：